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Le western blot de confirmation

Généralités

Un transfert de protéines (également appelé "technique des immunoempreintes" ou buvardage de western), est une méthode de biologie moléculaire permettant la détection et l'identification de protéines spécifiques dans un échantillon biologique (sérum ou autre extrait ou homogénat tissulaire). C'est un outil de diagnostic complémentaire réalisé en laboratoire.

Pour la maladie de Lyme

La sérologie s’effectue sur un prélèvement sanguin veineux, c'est une analyse qualitative. Il est possible grâce à cette technique de détecter la présence d'une protéine dans le sang et d'évaluer sa concentration. On va donc rechercher des protéines plus ou moins spécifiques de la borréliose de Lyme, qui permettront par croisements d'évaluer si une infection est active.

La signification des bandes **La signification des bandes **

Interprétation des résultats

Extrait d'un résultat de Western Blot positifExtrait d'un résultat de Western Blot positif

De façon brute, le résultat est matérialisé par une bandelette de nitrocellulose sur laquelle apparaît des bandes. La bandelette est graduée en masse molaire (kDa - kiloDaltons), quand une bande apparaît nettement c'est que la protéine associée avec ce poids moléculaire est exprimée dans le sérum (Électrophorèse).

doc12Bandelettes de nitrocellulose

Sur une bande de western blot graduée entre 0 kDa et 100 kDa, quelques bandes en particulier seront recherchées : toutes celles qui correspondent aux protéines caractéristiques de la borréliose de Lyme. Selon les tests utilisés, on considère que le test est positif lorsqu'on a 2 ou 5 bandes des protéines recherchées (marqueurs). Il est possible de pratiquer une interprétation poussée des marqueurs car certaines n'apparaissent que dans des formes tardives (avancement de la maladie), d'autres que chez certaines souches (ce qui nous informe sur le tropisme de la maladie) et d'autres sont peu spécifiques tel que la P41 (flagelline) qui est utilisé chez de nombreuses bactéries pour former les flagelles qui permettent leurs mouvements. Selon l'ILADS, si les bandes 31 et 34 sont positives, il y a de fortes chances que la personne ait été contaminée par Borrélia burgdorferi. Il n'est pas nécessaire que d'autres bandes soient positives pour conclure à un diagnostic positif de maladie de Lyme surtout s'il y a des symptômes cliniques.

doc13 bandelette Lyme western blot "LYMECHECK ALL DIAG MIKROGEN"

Qualité des tests

Généralement assez sensible et spécifique. Le test test All-Diag (de Mikrogen) a une très bonne réputation.

Tous les tests n'ont pas la même qualité, en effet celle-ci peut différer selon les points suivants :

  • Le nombre de protéines recherchées, plus il est important plus le test est efficace à condition d'en faire une bonne interprétation, un test comprend forcément P18, OspC, P39, VlsE, P41
  • La présentation des résultats est importante, certains tests matérialisent le cut-off qui est le niveau de positivité des protéines. Grâce à cela, il est possible de voir les protéines qui sont juste en dessous du seuil à la limite de la positivité.
  • La véracité des protéines choisies est aussi importante que le nombre de protéine, aux USA la suppression de l'OspA dans les tests a drastiquement baissé la sensibilité des tests.

Sensibilité : 60% Spécificité : 95 à 100%

Western Blot avec cut offWestern Blot avec cut off

Inconvénients de la technique

  • La technique est relativement onéreuse et elle demande un nombre important de manipulations en laboratoire,
  • L'interprétation des résultats est d'une grande précision mais elle nécessite une grande connaissance de la maladie et des protéines.
  • Manque de précision du test, la spectrométrie de masse permet de déterminer le poids moléculaire plus précisément,
  • Technique fiable au moins 4 à 6 semaines après une morsure d’arthropode.

Prix

Entre 120€ et 170€ si non remboursé selon les laboratoires. Il est parfois possible de faire l'examen sans prescription médicale, certains laboratoires refusent de le faire (même sans remboursement) sans avoir eu préalablement un résultat positif ou douteux au test ELISA.

Où aller ?

Quasiment tous les laboratoires réalisent le test Western Blot IgM et IgG pour la borréliose de Lyme cependant leur qualité n'est pas toujours satisfaisante.

Quelques laboratoires avec des tests de qualité :

Le 2016-03-02